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      比色法檢測整體甲基化水平

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      N6-methyladenosine (m6A),是一種腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基轉移酶催化下發生的修飾,普遍分布于不同類型的RNA中。m5C RNA是近年來發現的一類在tRNA及rRNA中高豐度存在的一種甲基化修飾。眾所周知,RNA甲基化在RNA的可變剪切、轉錄起始和翻譯中發揮重要作用。RNA甲基化水平與新陳代謝﹑遺傳發育﹑疾病發生發展等生物學過程密切相關。
      技術詳情

      技術簡介

      m6A/m5C RNA甲基化整體水平鑒定

      N6-methyladenosine (m6A),是一種腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基轉移酶催化下發生的修飾,普遍分布于不同類型的RNA中。m5C RNA是近年來發現的一類在tRNA及rRNA中高豐度存在的一種甲基化修飾。眾所周知,RNA甲基化在RNA的可變剪切、轉錄起始和翻譯中發揮重要作用。RNA甲基化水平與新陳代謝﹑遺傳發育﹑疾病發生發展等生物學過程密切相關。


      云序生物優勢

      (1) 靈敏高:

      起始RNA量低至100 ng;

      (2) 特異性高:

      嚴格設置的陽性/陰性對照,結果更加準確可信;

      (3) 穩定性高:

      背景信號極低,結果更加簡單穩定;

      (4) 速度快:

      比色分析,方便和快速;


      實驗原理

      比色法RNA甲基化定量檢測試劑盒提供了定量檢測總RNA甲基化水平的試劑。采用類似ELISA的方法:將實驗樣本與RNA甲基化標準品用RNA高結合溶液結合到孔底,然后添加捕獲抗體和檢測抗體檢測樣品中的m6A/m5C,通過微孔板讀取儀(如酶標儀)檢測。從孔中測得的信號或OD與樣本中RNA甲基化的數量成正比,并且樣本中RNA甲基化的量可以通過預先設定的RNA甲基化標準品來實現定量檢測。


      實驗步驟

      圖注:RNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法)操作步驟

      實例展示

      使用尿液樣本m6A定量檢測試劑盒(比色法)來定量人類尿液不同體積中m6A的含量。

      樣本要求

      樣品類型

      組織、細胞、體液、總RNA。其它類型樣品請詳詢。

      樣品量

      a) 細胞:2×106 

      b) 組織:50-100 mg

      c) 體液:全血 1 mL, 血清、血漿 2 mL

      腦脊液:3 mL

      尿液:20 mL

      d) 總RNA:1 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 無明顯降解,電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰,無明顯彌散或拖尾)

      樣品運輸及保存

      樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。

      樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;血液樣品應使用EDTA抗凝,不可用肝素;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。


      考文獻

      1. m6A Demethylase ALKBH5 Maintains Tumorigenicity of Glioblastoma Stem-like Cells by Sustaining FOXM1 Expression and Cell Proliferation Program 期刊:Cancer Cell 影響因子:22.84

      2. METTL14 suppresses the metastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6 -methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing  期刊:Hepatology 影響因子:14.08


      比色法檢測整體甲基化水平
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      m6A/m5C RNA甲基化整體水平鑒定

      N6-methyladenosine (m6A),是一種腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基轉移酶催化下發生的修飾,普遍分布于不同類型的RNA中。m5C RNA是近年來發現的一類在tRNA及rRNA中高豐度存在的一種甲基化修飾。眾所周知,RNA甲基化在RNA的可變剪切、轉錄起始和翻譯中發揮重要作用。RNA甲基化水平與新陳代謝﹑遺傳發育﹑疾病發生發展等生物學過程密切相關。


      云序生物優勢

      (1) 靈敏高:

      起始RNA量低至100 ng;

      (2) 特異性高:

      嚴格設置的陽性/陰性對照,結果更加準確可信;

      (3) 穩定性高:

      背景信號極低,結果更加簡單穩定;

      (4) 速度快:

      比色分析,方便和快速;


      實驗原理

      比色法RNA甲基化定量檢測試劑盒提供了定量檢測總RNA甲基化水平的試劑。采用類似ELISA的方法:將實驗樣本與RNA甲基化標準品用RNA高結合溶液結合到孔底,然后添加捕獲抗體和檢測抗體檢測樣品中的m6A/m5C,通過微孔板讀取儀(如酶標儀)檢測。從孔中測得的信號或OD與樣本中RNA甲基化的數量成正比,并且樣本中RNA甲基化的量可以通過預先設定的RNA甲基化標準品來實現定量檢測。


      實驗步驟

      圖注:RNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法)操作步驟

      實例展示

      使用尿液樣本m6A定量檢測試劑盒(比色法)來定量人類尿液不同體積中m6A的含量。

      樣本要求

      樣品類型

      組織、細胞、體液、總RNA。其它類型樣品請詳詢。

      樣品量

      a) 細胞:2×106 

      b) 組織:50-100 mg

      c) 體液:全血 1 mL, 血清、血漿 2 mL

      腦脊液:3 mL

      尿液:20 mL

      d) 總RNA:1 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 無明顯降解,電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰,無明顯彌散或拖尾)

      樣品運輸及保存

      樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。

      樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;血液樣品應使用EDTA抗凝,不可用肝素;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。


      考文獻

      1. m6A Demethylase ALKBH5 Maintains Tumorigenicity of Glioblastoma Stem-like Cells by Sustaining FOXM1 Expression and Cell Proliferation Program 期刊:Cancer Cell 影響因子:22.84

      2. METTL14 suppresses the metastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6 -methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing  期刊:Hepatology 影響因子:14.08


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