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技術簡介
m6A/m5C RNA甲基化整體水平鑒定
N6-methyladenosine (m6A),是一種腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基轉移酶催化下發生的修飾,普遍分布于不同類型的RNA中。m5C RNA是近年來發現的一類在tRNA及rRNA中高豐度存在的一種甲基化修飾。眾所周知,RNA甲基化在RNA的可變剪切、轉錄起始和翻譯中發揮重要作用。RNA甲基化水平與新陳代謝﹑遺傳發育﹑疾病發生發展等生物學過程密切相關。
云序生物優勢
(1) 靈敏高:
起始RNA量低至100 ng;
(2) 特異性高:
嚴格設置的陽性/陰性對照,結果更加準確可信;
(3) 穩定性高:
背景信號極低,結果更加簡單穩定;
(4) 速度快:
比色分析,方便和快速;
實驗原理
比色法RNA甲基化定量檢測試劑盒提供了定量檢測總RNA甲基化水平的試劑。采用類似ELISA的方法:將實驗樣本與RNA甲基化標準品用RNA高結合溶液結合到孔底,然后添加捕獲抗體和檢測抗體檢測樣品中的m6A/m5C,通過微孔板讀取儀(如酶標儀)檢測。從孔中測得的信號或OD值與樣本中RNA甲基化的數量成正比,并且樣本中RNA甲基化的量可以通過預先設定的RNA甲基化標準品來實現定量檢測。
實驗步驟
圖注:RNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法)操作步驟
實例展示
使用尿液樣本m6A定量檢測試劑盒(比色法)來定量人類尿液不同體積中m6A的含量。
樣本要求
樣品類型
組織、細胞、體液、總RNA。其它類型樣品請詳詢。
樣品量
a) 細胞:2×106
b) 組織:50-100 mg
c) 體液:全血 1 mL, 血清、血漿 2 mL
腦脊液:3 mL
尿液:20 mL
d) 總RNA:1 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 無明顯降解,電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰,無明顯彌散或拖尾)
樣品運輸及保存
樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。
樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;血液樣品應使用EDTA抗凝,不可用肝素;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。
參考文獻
1. m6A Demethylase ALKBH5 Maintains Tumorigenicity of Glioblastoma Stem-like Cells by Sustaining FOXM1 Expression and Cell Proliferation Program 期刊:Cancer Cell 影響因子:22.84
2. METTL14 suppresses the metastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6 -methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing 期刊:Hepatology 影響因子:14.08
技術簡介
m6A/m5C RNA甲基化整體水平鑒定
N6-methyladenosine (m6A),是一種腺嘌呤核苷酸在腺苷酸甲基轉移酶催化下發生的修飾,普遍分布于不同類型的RNA中。m5C RNA是近年來發現的一類在tRNA及rRNA中高豐度存在的一種甲基化修飾。眾所周知,RNA甲基化在RNA的可變剪切、轉錄起始和翻譯中發揮重要作用。RNA甲基化水平與新陳代謝﹑遺傳發育﹑疾病發生發展等生物學過程密切相關。
云序生物優勢
(1) 靈敏高:
起始RNA量低至100 ng;
(2) 特異性高:
嚴格設置的陽性/陰性對照,結果更加準確可信;
(3) 穩定性高:
背景信號極低,結果更加簡單穩定;
(4) 速度快:
比色分析,方便和快速;
實驗原理
比色法RNA甲基化定量檢測試劑盒提供了定量檢測總RNA甲基化水平的試劑。采用類似ELISA的方法:將實驗樣本與RNA甲基化標準品用RNA高結合溶液結合到孔底,然后添加捕獲抗體和檢測抗體檢測樣品中的m6A/m5C,通過微孔板讀取儀(如酶標儀)檢測。從孔中測得的信號或OD值與樣本中RNA甲基化的數量成正比,并且樣本中RNA甲基化的量可以通過預先設定的RNA甲基化標準品來實現定量檢測。
實驗步驟
圖注:RNA甲基化定量檢測試劑盒(比色法)操作步驟
實例展示
使用尿液樣本m6A定量檢測試劑盒(比色法)來定量人類尿液不同體積中m6A的含量。
樣本要求
樣品類型
組織、細胞、體液、總RNA。其它類型樣品請詳詢。
樣品量
a) 細胞:2×106
b) 組織:50-100 mg
c) 體液:全血 1 mL, 血清、血漿 2 mL
腦脊液:3 mL
尿液:20 mL
d) 總RNA:1 μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 無明顯降解,電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰,無明顯彌散或拖尾)
樣品運輸及保存
樣品運輸:樣品置于1.5mL離心管中,封口膜封好,干冰運輸。
樣品保存:細胞樣品或新鮮組織塊可用TRIZOL或RNA保護劑處理,液氮凍存后-80℃保存;血液樣品應使用EDTA抗凝,不可用肝素;RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中,-80℃保存,避免反復凍融。
參考文獻
1. m6A Demethylase ALKBH5 Maintains Tumorigenicity of Glioblastoma Stem-like Cells by Sustaining FOXM1 Expression and Cell Proliferation Program 期刊:Cancer Cell 影響因子:22.84
2. METTL14 suppresses the metastatic potential of hepatocellular carcinoma by modulating N6 -methyladenosine-dependent primary MicroRNA processing 期刊:Hepatology 影響因子:14.08
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