技術簡介

蛋白質組相對定量分析

蛋白質非標記定量技術（label-free）通過液質聯用技術對蛋白質酶解肽段進行質譜分析，無需使用昂貴的穩定同位素標簽做內部標準，它克服了傳統的同位素標記的缺點，即過高的樣品濃度, 復雜的實驗方案及價格過高的原料等，該方法具有速度更快，更簡潔及更簡明的結果等優點。蛋白質非標記定量技術（label-free）只需分析大規模鑒定蛋白質時所產生的質譜數據，比較不同樣品中相應肽段的信號強度，從而對肽段對應的蛋白質進行相對定量。 

實驗流程

云序優勢

檢測通量高：

一次性的對樣品中的全部蛋白進行相對定量分析。

結果準確：

利用高分辨率的質譜法檢測，相對二維電泳等傳統方法而言更加準確，快捷。

無需標記：

克服標記樣本的局限性，可研究大規模樣本。

樣品需求量少：

每run可檢測多達20種蛋白。

性價比高：

無需使用昂貴的標記實際，實驗性價比高。

樣本要求

1）富含雜質或蛋白含量低的樣本，如植物的根莖、木質部、韌皮部組織等：干重≥5g

2）植物類樣本送樣量同樣適合于蕈類真 菌，如蘑菇、木耳：濕重≥1g。

3）細胞樣本如需進行磷酸化位點富集鑒定，細胞數目須達到：107，約細胞沉淀體積100μl。

4）由于解凍后血細胞易破裂，細胞內蛋白溶出來會影響分析結果，因此建議不要直接送全血樣本。

5）血液類樣本：如果直接送提取蛋白，需先去除高豐度蛋白。

6）尿液樣本：送樣前1000rpm離心5min，棄去沉淀。

7）如果是其他特殊樣本，或對樣本要求有疑問，請聯系我們。

數據分析（僅供展示 詳見demo報告）

數據產出統計

蛋白質鑒定結果

蛋白質定量結果

蛋白質GO分析

蛋白質COG分析

蛋白質Pathway代謝通路分析

差異蛋白GO富集分析

差異蛋白的Pathway富集分析

重復性分析（僅針對有重復設計的項目）

多樣品間表達模式聚類（適用于樣本數≥3的項目）

案例解析

案例1：研究小鼠體外胚胎移植引起長期效應的潛在原因

研究內容:

以體內受精（IVO）與體外受精（IVP）發育形成的胚胎為對象，比較其蛋白質組差異，集中研究體外受精對后代產生長期效應的潛在原因，為研究輔助生殖技術（ART）產生的后代發生多重畸變的分子起源和潛在機制提供參考。

研究路線:

樣本：分別取IVO 7.5，IVO10.5，IPV 7.5，IPV10.5時的小鼠胚胎。

技術：label-free質譜，3次技術重復。

研究結果:

IVO7.5/IPV7.5組、 IVO10.5/IPV10.5組的差異蛋白分別為300和262個。 差異蛋白與轉錄后、翻譯和翻譯后調控功能相關，并且在mRNA和蛋白層面表達相關性較好。部分差異蛋白參與能量和氨基酸代謝以及神經核感官發育的過程，可以作為研究ART誘導子宮發育遲緩和神經發育異常機制的候選靶標。差異蛋白在神經退行性疾病通路上明顯富集，提示通過ART產生的后代對其易感性可能會增加。