外泌體（Exosomes）是一種直徑在40～100 nm的圓形單層膜結構，是細胞外泌囊泡中體積較小的一種。外泌體可被大多數細胞分泌，并分布于唾液、血漿、乳汁、尿液等體液中。外泌體中不僅包含蛋白質成分，還包括一些RNA成分，如微小RNA ( microRNA，miRNA)、長鏈非編碼RNA和mRNA、環狀RNA（circular RNA，circRNA）。外泌體所攜帶的這些RNA統稱為外泌體來源RNA，具有完整的序列結構和生物活性。外泌體中大約含幾百種miRNAs，通過外泌體miRNA測序，研究人員可獲得與疾病相關的遺傳特征（生物標志物），為將來腫 瘤治 療領域通過液體活檢來尋找有效藥 物。

一站式服務

客戶只需提供細胞上清、血清、血漿、外泌體RNA，云序生物提為您完成樣品準備，文庫制備，上機測序到數據分析的整套服務。

商業化試劑盒抽提外泌體

云序生物使用成熟的商業化試劑盒抽提外泌體，極大改善樣品的均一性?？蛻艨蛇x擇從外泌體到RNA測序一步流程法，也可選擇先提取外泌體，在由外泌體抽取RNA兩步流程法。

特異性富集miRNA片段

特異性富集和檢測miRNA，miRNA有效數據高于其它公司提供的常規small RNA測序服務。

專業的生物信息學分析

云序生物具有強大的生物信息學團隊，能夠滿足客戶對數據各類深入的分析要求。

樣本要求

樣品類型：

細胞、體液或RNA樣品。其它類型樣品請詳詢。

樣品量：

a) 細胞 2×10⁷

b) 組織 100 mg 

c) 體液 全血、血清、血漿 5 mL  

腦脊液 5 mL  

尿液  100 mL

d) 總RNA 2 μg （OD260/280≥1.8；OD260/230≥1.5，無明顯降解，電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰，無明顯彌散或拖尾 28S：18S≥1.5或者RIN≥7）

樣品運輸及保存：

樣品運輸：樣品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰運輸 

樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊（切成5-10 mg的小塊），可用TRIZOL或RNA保護劑處理，液氮凍存后，-80℃保存，RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，樣品保存期間避免反復凍融。

數據分析（下列有※表示個性化分析）

1、差異miRNA篩選與聚類篩選

兩組或多組樣品間的差異表達miRNA（Fold Change≥2， P值≤ 0.05）

注：Fold Change代 表差異程度，P值代 表差異的明顯性，篩選中采用的倍數變化會根據具體數據情況進行調整。

2、miRNA靶基因預測※
云序生物整合了TargetScan、mirBase、miRanda等權威miRNA靶基因預測軟件，提供嚴謹可靠的靶基因預測數據，通過軟件預測miRNA的靶基因，從而推測miRNA的生物學功能。

3、miRNA靶基因網絡
構建miRNA靶基因網絡。

4、miRNA靶基因GO和信號通路分析
對miRNA的靶基因進行GO和信號通路分析，從而幫助推斷miRNA的生物學功能。

5、miRNA-靶基因GO或靶基因通路網絡分析 ※
利用miRNA靶基因及靶基因GO或信號通路分析，構建網絡圖，通過網絡圖可發現核 心miRNA以及miRNA調控的核 心基因功能。

6、miRNA上游轉錄因子分析※
預測特定miRNA上游的轉錄因子結合位點，幫助推斷該miRNA的調控機制。

7、新miRNA預測（脊椎動物）
預測尚未被發現的新miRNA。

案例1：脂肪組織巨噬細胞分泌外泌體miRNA可改善體內胰島素敏感性

原文：Adipose Tissue Macrophage-Derived Exosomal miRNAs Can Modulate In Vivo and In Vitro Insulin Sensitivity

期刊：Cell 影響因子：30.41

外泌體中包含多種miRNA，調控靶細胞生理活性，本文發現脂肪組織巨噬細胞（adipose tissue macrophages，ATMs）分泌的外泌體中含有miRNA并可以轉移到胰島素的靶細胞中，從而調節靶細胞對胰島素的敏感性以及體內的總糖代謝穩態。Olefsky團隊從肥胖小鼠脂肪組織內分離出巨噬細胞，再收集細胞里的外泌體，用它們處理體型瘦的健康小鼠，發現接受了外源外泌體的小鼠雖然體重依然正常，但卻出現肥胖誘導型胰島素抵抗癥狀。相反，提取瘦小鼠來源的脂肪組織巨噬細胞外泌體，并用它在肥胖小鼠上治 療，會大幅改善體內和體外的葡萄糖耐受和胰島素敏感性。研究人員證明miR-155是肥胖個體脂肪組織巨噬細胞外泌體差異表達的miRNA之一，miR-155極有可能直接通過抑 制其靶基因PPARγ來抑 制胰島素信號傳導和葡萄糖耐受。

圖1. 肥胖導致miRNA表達譜的變化

案例2：血液外泌體miRNA作為非小細胞ai分子標志物分析

原文：Evaluation of tumor-derived exosomal miRNA as potential diagnostic biomarkers for early stage non-small-cell lung cancer using next-generationsequencing

期刊：Clinical Cancer Reserach 影響因子：8.78

本文發現腺ai（AC）和鱗ai（SCC）患者的血漿可分離出腫 瘤來源外泌體，其中外泌體miRNA極有希望用于NSCLC早期預測和診斷。文章利用miRNA-seq對46個I期NSCLC患者和42個健康個體的外泌體進行miRNA分析，以鑒定和驗證AC和SCC的特異性表達miRNA。結果表明，miR-181-5P、miR-30a-3p、miR-30e-3p和miR-361-5p為AC特異性的；miR-10b-5p、miR-15b-5p和miR-320b為SCC特異性的。后續繪制ROC曲線預測評估三種組合miRNA疾病相關性。事實證明這些miRNA有極大潛力成為NSCLC早期診斷生物標志物。

圖2. 正常人與腺ai與鱗ai患者miRNA表達情況相關系數圖