技術簡介
microRNA是一類存在于真核生物中的，長度為～22nt的單鏈小分子RNA。miRNA通過與靶mRNA的結合，促使mRNA降解或是阻礙其翻譯，從而抑 制靶基因的表達。miRNA參與細胞增殖、凋亡、分化、代謝、發育等各種生物學過程，并可以作為生物標志物或疾病調控因子發揮作用。云序生物的miRNA測序服務配合強大的生信分析實力，我們可提供的不僅是海量的測序數據，而且是根據您的研究目的，針對性地挖掘提煉出取之即可用的結果及出版級圖片。
云序優勢
一站式服務：
客戶只需提供細胞、組織、體液或總RNA，云序生物為您完成從樣品準備，文庫制備，上機測序到數據分析的整套服務流程。
特異性富集miRNA片段：
特異性富集和檢測miRNA，miRNA有效數據比例高于其它公司提供的常規small RNA測序服務。
專業的生物信息學分析：
云序生物具有強大的生物信息學團隊，能夠滿足客戶的各類深入數據分析要求。
樣本要求
樣品類型：
組織、細胞、體液或RNA樣品。其它類型樣品請詳詢。
樣品量：

a) 細胞：2×10⁶

b) 組織：50 mg

c) 體液：全血、血清、血漿2-3 ml

腦脊液：5 ml

尿液：50 ml

d) 總RNA：2μg (OD260/280≥1.8;OD260/230≥1.5; 無明顯降解，電泳檢測樣品特征性條帶完整清晰，無明顯彌散或拖尾)

樣品運輸及保存： 

樣品運輸：樣品置于1.5mL管中，封口膜封好，干冰運輸。

樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊（切成5-10 mg的小塊），可用TRIZOL或RNA保護劑處理，液氮凍存后，-80℃保存，RNA樣品可溶于乙醇或RNA-free的超純水中，-80℃保存，樣品保存期間避免反復凍融。

數據分析（下列有※表示個性化分析）

1、差異miRNA篩選與聚類篩選 

兩組或多組樣品間的差異表達miRNA（Fold Change≥2， P值≤ 0.05）。

注：Fold Change代 表差異程度，P值代 表差異的明顯性，篩選中采用的倍數變化會根據具體數據情況進行調整 。

2、miRNA靶基因預測※

云序生物整合了TargetScan、mirBase、miRanda等權威miRNA靶基因預測軟件，提供極嚴謹可靠的靶基因預測數據，通過軟件預測miRNA的靶基因，從而推測miRNA的生物學功能。

3、miRNA靶基因網絡

構建miRNA靶基因網絡。

4、miRNA靶基因GO和信號通路分析

對miRNA的靶基因進行GO和信號通路分析，從而幫助推斷miRNA的生物學功能。

5、miRNA-靶基因GO或靶基因通路網絡分析※ 

利用miRNA靶基因及靶基因GO或信號通路分析，構建網絡圖，通過網絡圖可發現核 心miRNA以及miRNA調控的核 心基因功能。

6、miRNA上游轉錄因子分析※ 

預測特定miRNA上游的轉錄因子結合位點，幫助推斷該miRNA的調控機制。

7、新miRNA預測（脊椎動物） 

預測尚未被發現的新miRNA。

案例解析
案例1：通過血清中特定microRNA的表達特征預測非小細胞肺ai患者生存期長短

原文：Serum microRNA signatures identified in a genome-wide serum microRNA expression profiling predict survival of non-small-cell lung cancer

期刊：Journal Of Clinical Oncology 影響因子：26.30
作者通過microRNA高通量測序對兩組生存期不同的非小細胞肺ai患者的血清樣品進行檢測，發現了11個差異表達的microRNA。通過實時定量PCR進一步驗證，找出了4個與生存期長短相關的microRNA。通過生物信息學分析，根據這4個microRNA在訓練樣品組中的表達情況構建了一個預測模型?；谶@個模型，只需檢測血清中這4個microRNA的表達值，就可以推斷出罹患非小細胞肺ai的風險，并預測生存期長短。

圖1. 303個早期非小細胞肺ai患者的風險值分析

（A）風險值分布；（B）患者的生存狀況和生存時間；（C）4個關鍵microRNA在非小細胞ai患者中的表達情況