技術簡介

蛋白免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎，研究蛋白-蛋白間相互作用的經典方法。蛋白免疫共沉淀的設計理念是，假設一種已知蛋白是某個大的蛋白復合物的組成成員，那么利用這種蛋白的特異性抗體，就可能將整個蛋白復合物從溶液中“拉”下來，進而可以用于鑒定這個蛋白復合物中的其他成員。通過質譜檢測已知蛋白的未知結合蛋白，通過 Western Blot檢測兩種目標蛋白是否在體內結合。云序生物具有成熟的蛋白質組學平臺，提供CoIP-質譜和CoIP- Western Blot的全套服務。

圖注：云序 CoIP 實驗流程

云序優勢

一站式服務：

客戶只需提供細胞或組織以及抗體，云序生物為您完成樣品處理、IP實驗、蛋白檢測到數據分析整套服務流程。

低豐度富集：
富集檢測低豐度目的蛋白-蛋白復合物
具有成熟蛋白質組學平臺：
提供CoIP-質譜和CoIP-Western Blot。

樣本要求

1）樣品類型：細胞、組織，其它樣品信息請詳詢

2）樣品信息：目標蛋白具體信息以及物種信息

3）樣品量

細胞：5×10⁸

組織：500mg

4）樣品保存：細胞樣品或新鮮組織塊（切成 5-10 mg 小塊），液氮凍存后，-80℃

保存。

5）樣品運輸：干冰運輸。

案例解析

案例一：CoIP尋找已知蛋白的未知結合蛋白（CoIP-質譜）

原文：NbCSPR underlies age-dependent immune responses to bacterial cold shock protein in Nicotiana benthamiana

期刊：Proceedings of the National Academy of Sciences 影響因子：9.58

植物中，病原物相關分子模式（PAMPs）被模式識別受體（PRRs）識別后，會與LRR-RK BRI1相關激酶1（BAK1）相互作用，從而引發植物的免疫應答反應。本文作者使用BAK1作為分子誘餌來尋找細菌冷休克蛋白的csp22肽（一種PAMPs）所需的模式識別受體（PRRs），作者建立了一種方法來識別僅在csp22處理后與BAK1相互作用的蛋白質，經csp22處理后BAK1在yan草中短暫表達，用CoIP-MS方式鑒定與BAK1互作的蛋白，從而識別csp22所需的新的PRRs--NbCSPR。

圖1.尋找BAK1結合的蛋白--NbCSPR

案例二：CoIP探究兩種已知蛋白的互作（CoIP-Western Blot）

原文：A Novel Allosteric Inhibitor of Phosphoglycerate Mutase 1 Suppresses Growth and Metastasis of Non-Small-Cell Lung Cancer

期刊：Cell Metabolism 影響因子：22.42

PGAM1(磷酸甘油酸突變酶1) 是有氧糖酵解過程中重要的酶，參與細胞內生物大分子合成并維持氧化還原穩態，從而促進腫 瘤細胞增殖及轉移。近期研究表明，非小細胞肺ai（NSCLC）患者中PGAM1表達增加且與不良預后明顯相關。本文發現一種新型PGAM1變構抑 制劑HKB99，通過CoIP實驗證實HKB99能抑 制PGAM1和ACTA2的相互作用，從而抑 制非小細胞肺ai的增殖和分化過程，達到抑 制腫 瘤生長的目的。

圖2. HKB99能抑 制PGAM1和ACTA2的相互作用