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云序客戶文章|慢性硬膜下血腫外泌體microRNA抑 制血腫吸收并加重神經功能缺損
外泌體是指包含多種RNA（環狀RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等）和蛋白質的盤狀囊泡（30-200nm）。目前，科研工作者對外泌體當中的分子機制的研究才剛剛起步，對外泌體的研究興趣也是日益增長。
文章導讀
外泌體是指包含多種RNA（環狀RNA、miRNA、LncRNA和mRNA等）和蛋白質的盤狀囊泡（30-200nm）。目前，科研工作者對外泌體當中的分子機制的研究才剛剛起步，對外泌體的研究興趣也是日益增長。小編今 天以慢性硬膜下血腫當中外泌體的研究為例進行解析。
云序生物客戶天津醫科大學總醫院江榮才、張建寧課題組于2019年12月16日在Aging雜志（IF 5.5）上發表了關于外泌體對慢性硬膜下血腫的影響。作者利用電鏡和納米顆粒跟 蹤技術對外泌體進行了鑒定。在慢性硬膜下血腫(CSDH)大鼠模型上研究了血腫來源外泌體的功能。血腫來源外泌體抑 制SDH大鼠血腫吸收，加重神經功能缺損。作者檢測了外泌體對人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)血管生成和細胞通透性的影響。與血管內皮細胞共培養發現，血腫來源的外泌體被血管內皮細胞攝取，導致管狀結構和血管通透性增強。此外，Ang-2表達增加，Ang-1表達降低。外泌體中富含miR-144-5p等microRNAs，它們可以運送到人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)，促進血管生成，增加膜通透性。miR-144-5p在人臍靜脈內皮細胞和SDH大鼠的過表達促進了異常血管生成，減少了血腫吸收，這與血腫來源外泌體的作用相似。綜上，血腫來源的外泌體通過miR-144-5p促進CSDH異常血管生成，并通過miR-144-5p抑 制血腫吸收。
發表期刊：Aging
影響因子：5.515
發表日期：20191216
文獻鏈接：
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6949077/
文章內容
（1）血腫來源外泌體的分離與鑒定
作者分離并鑒定了來自CSDH患者血腫的外泌體。進行了NanoSight顆粒跟 蹤分析以評估外泌體的大小和顆粒數。外泌體的直徑范圍為30-150 nm（峰值為74 nm）。WB鑒定了外泌體典型的分子標記，包括CD9，CD63和TSG101。使用透射電子顯微鏡（TEM）對外泌體形態進行了評估。
圖注：血腫來源外泌體的分離與鑒定（云序提供以上服務）
（2）血腫來源的外泌體功能
作者評估了急性SDH大鼠模型中血腫來源的外泌體對血腫吸收和神經功能的影響。利用磁共振成像（MRI）以評估外泌體注射后對血腫體積的影響。與注射后第7天和第14天的對照相比，在用血腫來源的外泌體治 療的大鼠（EX血腫組）中觀察到更高的血腫體積。作者使用改良的神經系統嚴重程度評分（mNSS）評估了神經系統缺陷。與先前的研究一致，SDH大鼠的mNSS評分高于對照組。作者發現，EX血腫組的mNSS評分高于注射后14天和21天的對照組。因此證明，血腫來源的外泌體能抑 制血腫吸收并加劇神經功能缺損。
圖注：血腫來源的外泌體在體內抑 制血腫吸收并加劇神經功能缺損
血管生成在SDH的發病機理中起重要作用。因此，作者使用體外血管形成試驗研究了血腫來源的外泌體對HUVEC中血管生成的影響。結果發現，用血腫來源外泌體（EX-血腫組）治 療的HUVECs中，血管的分支和導管增加。作者還研究了外泌體對體外HUVEC單層滲透性的影響。與對照組相比，EX血腫中FITC-Dextran的強度更高，表明血腫來源的外泌體增加了血管通透性。
圖注：血腫來源的外泌體導致異常血管生成并增加血管通透性
（3）CSDH患者血腫和血清中ANG-1和ANG-2的表達
作者調查了CSDH和健康對照患者血腫和血清樣本中與血管生成相關的細胞因子ANG-1和ANG-2的濃度。比較CDSH和健康對照組的血清樣本中ANG-1和ANG-2的濃度，發現血腫中ANG-1的濃度較低，而ANG-2的濃度較高。
圖注：CSDH患者血腫中ANG-1低表達同時ANG-2高表達
（4）血腫來源的外泌體將miR-144-5p傳遞給HUVECs
作者調查了HUVEC是否可以吸收血腫來源的外泌體。共培養后，發現血腫來源的外泌體與HUVEC共定位，表明外泌體可以被HUVEC吸收。鑒于外泌體中富含miRNA，作者假設外泌體來源的miRNA可以調節HUVEC中的基因表達。因此，作者進行了miRNA測序（本實驗由云序提供），以評估血腫和血清來源的外泌體之間miRNA含量的差異。與血清來源的外泌體相比，在血腫中觀察到七個miRNA的變化。五個miRNA被上調，兩個miRNA被下調。在這些miRNA中，miR-144-5p表現出表達差異。通過RT-PCR證實，與血清來源的外泌體相比，血腫來源的外泌體中的miR-144-5p表達更高。因此，HUVEC攝取外泌體會導致miR-144-5p表達增加。
圖注：血腫來源的外泌體富含miR-144-5p，可將其轉移至HUVEC
（5）MiR-144-5p的過表達促進血管生成并減少體內外血腫吸收
作者在HUVEC中過表達miR-144-5p，并分析了其對體外血管生成的影響。用miR-144-5p轉染HUVEC導致血管數、分支形成和血管長度增加。另外，miR-144-5p過表達導致HUVEC單層對FITC-Dextran的滲透性增加。WB顯示，miR-144-5p過表達導致HUVEC中ANG-2升高而ANG-1表達降低。作者在SHD大鼠中過表達miR-144-5p，導致血腫吸收減少。過表后7天觀察到ANG-2升高，而ANG-1降低，與體外研究的結果一致。
圖注：miR-144-5p的過表達對HUVEC的影響
文章總結
總體來說，作者通過外泌提取和鑒定證明外泌體存在于CSDH患者的血腫中。然后通過miRNA測序（本實驗由云序提供）找到血腫來源的外泌體中差異表達的miR-144-5p，并證實其可以通過外泌體傳遞至HUVEC，導致異常血管生成和血管通透性增加，血腫吸收減少。因此在嘗試非手術治 療CSDH時應考慮血管生成和血管成熟對CSDH的影響。血腫來源的外泌體當中miR-144-5p也是CSDH中潛在的治 療靶標。
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