臨近年末，恭賀云序客戶再發10分RNA甲基化文章！

為了探究m6A在HB中的潛在角色，作者首先在HB組織和鄰近組織中檢測整體m6A修飾水平（云序生物提供此項服務）和m6A writers、erasers和 readers酶的表達情況。結果顯示HB組織m6A的整體水平升高，METTL3、 WTAP、FTO 和 YTHDF2表達顯 著上調，METTL14、KIAA1429 和ALKBH5表達不變。然后作者在HB中下調METTL3、WTAP、 FTO和YTHDF2以探究其在HB細胞中的功能。結果顯示下調這些酶能夠**抑 制HB細胞增殖、克隆形成能力，促進凋亡?？紤]到這些基因的催化功能和m6A修飾的上調水平，作者選擇METTL3作為研究對象。 

作者在25對HB病人樣本中檢測METTL3的表達，并進行了生存曲線分析和ROC曲線分析。生存曲線分析顯示METTL3的表達的高表達與復發頻繁、存活率低相關。ROC曲線分析進一步證實了METTL3具有較高的臨床診斷價值(AUC = 0.8928；P<0.0001)。

為了進一步驗證METTL3對HB的致ai潛能，作者在裸鼠體內進行皮下成瘤實驗，以檢測METTL3在HB成瘤中的功能。結果顯示METTL3可以顯 著降低腫 瘤的大小和重量。

圖注：METTL3在體內促進HB腫 瘤生長

4、HB腫 瘤中m6A修飾的mRNA的重要生物學通路
作者通過對m6A MeRIP-seq（云序生物提供此項服務）數據進行分析，在檢測到的所有1089個基因中，其中525個基因共同存在于正常組織與腫 瘤組織中。作者還分析了正常組織和腫 瘤組織中m6A峰值與基因數量之間的可能關系和共有motif基序，基因偏好性（主要富集在終止密碼子區和CDS區）。通過m6A MeRIP-seq和mRNA-seq（云序生物提供此項服務）進行關聯分析，結果顯示m6A修飾能夠導致基因表達上調。為了探究m6A對HB的影響，作者篩選與基因表達相關性比較強的m6A上調的基因進行KEGG預測分析，顯示主要與病 毒致ai、腫 瘤中蛋白多糖、內質網蛋白加工、Wnt信號通路等。由于Wnt /β-catenin信號通路能夠促使腫 瘤惡化，因此作者假設上調m6A甲基化可能通過激 活Wnt/β-catenin促進腫 瘤的生長。其中，CTNNB1、CCND1和NKD1參與Wnt /β-catenin信號通路。其中CTNNB1的m6A豐度是較**的。因此作者選擇CTNNB1作為后續靶點，進行功能機制實驗。

圖注：m6A修飾的mRNA的重要生物學通路

5、m6A調控CTNNB1的活化
幾乎50-90%的HB疾病都會發生CTNNB1的突變，且CTNNB1是Wnt/β-catenin信號通路的關鍵基因，因此作者選擇CTNNB1作為后續的研究對象。發現CTNNB1在HB中顯 著上調；下調CTNNB1能夠降低HB細胞的活力，促進HB細胞的凋亡。作者還發現CTNNB1和METTL3在表達上呈**正相關，且下調METTL3能夠降低CTNNB1的表達。m6A MeRIP-PCR（云序生物提供此項服務）結果顯示，下調METTL3能夠降低CTNNB1的甲基化水平，同時降低的m6A甲基化能降低CTNNB1的穩定性。 

總結